錯誤 1:直接使用未經過濾的流動相。部分操作人員為節省時間,將未經過 0.22μm(或 0.45μm)濾膜過濾的甲醇、乙腈或緩沖液直接倒入溶劑瓶。流動相中可能含有的微小顆粒(如試劑雜質、塵埃)會隨流動相進入色譜柱,堵塞柱內填料孔隙,導致柱壓驟升、柱效快速下降,甚至造成色譜柱損壞;同時,顆粒還可能污染進樣閥與檢測器流通池,影響儀器正常運行。正確做法是:所有流動相(包括水相、有機相、緩沖液)均需通過對應孔徑的濾膜過濾,且水相、有機相需使用不同濾膜(水相用親水膜,有機相用疏水膜),避免濾膜溶解污染流動相。
錯誤 2:流動相未脫氣。若直接使用未脫氣的流動相,其中溶解的氧氣、氮氣等氣體在色譜柱中因壓力變化會釋放氣泡,氣泡進入檢測器后會導致基線劇烈波動、出現尖銳雜峰,嚴重時會中斷流動相輸送,造成分析數據失真;此外,溶解氧還可能與流動相中的有機相(如甲醇)或樣品發生反應,影響檢測結果準確性。正確做法是:采用超聲脫氣(一般超聲 15-20 分鐘)、在線脫氣或真空脫氣等方式,尤其在使用緩沖液或混合流動相時,需延長脫氣時間,避免氣泡殘留。
錯誤 1:樣品未過濾或過濾不規范。若將含有懸浮顆粒、絮狀物的樣品直接進樣,顆粒會堵塞進樣針、進樣閥,甚至隨樣品進入色譜柱,與流動相中的雜質共同加劇柱污染;同時,顆粒在檢測器中會產生假信號,導致色譜峰形拖尾、基線漂移,無法準確判斷樣品組分。正確做法是:使用 0.22μm(與流動相濾膜孔徑一致)的針式濾頭對樣品進行過濾,過濾時需棄去初始幾滴濾液,避免濾頭污染樣品;對于粘稠度較高的樣品,需先進行稀釋或離心處理,再進行過濾。
錯誤 2:樣品溶劑與流動相不兼容。部分操作人員為方便,使用與流動相極性差異過大的溶劑溶解樣品(如用純甲醇溶解需用磷酸鹽緩沖液 - 乙腈作為流動相的樣品),會導致樣品進入色譜柱后因溶劑與流動相混合不均,出現 “溶劑效應"—— 表現為色譜峰分裂、峰形不對稱、保留時間漂移,嚴重時會影響組分分離度,無法準確定量。正確做法是:選擇與流動相初始比例(或極性相近)的溶劑溶解樣品,若樣品在流動相中溶解度較低,可適當提高有機相比例,但需確保溶劑與流動相混合后無分層、無沉淀。
錯誤 1:開機后直接升壓,未進行系統排氣。開機后若未先開啟泵進行低流速(如 0.2-0.5mL/min)排氣,直接將流速升至分析流速并升壓,會導致系統內殘留的氣泡被壓縮在管路或色譜柱中,形成 “氣塞",造成柱壓異常升高;同時,突然升壓會對色譜柱填料產生沖擊,導致填料顆粒塌陷,縮短色譜柱使用壽命。正確做法是:開機后先將泵流速調至 0.5mL/min,打開排液閥(或斷開色譜柱入口端),待流出液無氣泡后,關閉排液閥(或連接色譜柱),再逐步升高流速至分析條件,避免流速驟升驟降。
錯誤 2:分析結束后未及時沖洗系統與色譜柱。實驗結束后若直接關機,流動相中殘留的緩沖液(如磷酸鹽、醋酸鹽)會在色譜柱內干燥結晶,堵塞填料孔隙;同時,緩沖液與有機相混合后若長時間停留,可能產生沉淀,污染進樣閥與檢測器流通池;對于反相色譜柱,若未用純有機相(如甲醇、乙腈)封存,柱內殘留的水相會導致填料水解,降低柱效。正確做法是:分析結束后,先使用不含緩沖鹽的流動相(如甲醇 - 水)沖洗系統 20-30 分鐘,再用純有機相沖洗色譜柱 30 分鐘以上(確保柱內無緩沖鹽殘留),最后關閉泵與檢測器,待柱溫降至室溫后關機。
錯誤 3:檢測器操作不當,影響檢測精度。常見錯誤包括:紫外檢測器未進行基線校正即開始分析,導致基線漂移影響峰面積積分;熒光檢測器未開啟氙燈預熱,直接進行檢測,導致光源強度不穩定,出現熒光信號波動;檢測器流通池污染后未及時清洗,殘留的樣品或流動相在流通池內吸附,導致檢測靈敏度下降,出現假陰性結果。正確做法是:開機后需對檢測器進行基線校正(紫外檢測器需預熱 30 分鐘以上),熒光檢測器需提前開啟氙燈預熱 1 小時;實驗結束后,需用合適的溶劑(如甲醇、乙腈)沖洗流通池,若流通池污染嚴重,可使用稀硝酸(針對金屬離子污染)或超聲清洗(需拆卸流通池,按儀器說明書操作)。
錯誤 1:長期不更換進樣針與密封圈。進樣針長期使用后,針尖易磨損或變形,導致進樣體積不準確,出現定量重復性差;進樣閥密封圈長期受流動相腐蝕、樣品摩擦,會出現密封不嚴,導致流動相泄漏、進樣交叉污染(前一樣品殘留影響后一樣品分析)。正確做法是:每使用 500-1000 次進樣針后,檢查針尖狀態,若出現磨損及時更換;進樣閥密封圈每使用 3-6 個月(或出現泄漏時)更換,更換時需注意密封圈型號與安裝方向,避免安裝錯誤導致密封失效。
錯誤 2:色譜柱儲存與使用不當。將不同類型的色譜柱(如反相柱、正相柱)混合儲存,未標注使用記錄,易導致色譜柱誤用(如用反相柱分析正相樣品);色譜柱長期不用時,未按要求用專用溶劑封存(如正相柱用正己烷 - 異丙醇封存),導致柱內填料干裂或受潮;使用時隨意改變色譜柱溫度范圍(如超過色譜柱標注的最高溫度),導致填料性能退化,柱效下降。正確做法是:色譜柱儲存時需標注型號、使用時間、上次分析樣品類型,按極性或類型分類存放;長期不用時,用對應的封存溶劑沖洗后密封兩端,存放于陰涼干燥處;使用時嚴格遵守色譜柱的溫度、pH 范圍要求,避免超范圍使用。
總之,高效液相色譜儀的操作需嚴格遵循 “預處理規范、參數設置精準、維護及時" 的原則,避免上述錯誤操作。只有規范操作流程,才能保障分析結果的準確性與可靠性,延長儀器使用壽命,為實驗研究與質量檢測提供有力支撐。